SNP Pol DNA Polymerase

SNP Pol DNA polymeráza

• SNP Pol DNA polymerázu je možné jednoducho, časovo a nákladovo efektívne použiť na skríning bodových mutácií, napr. CRISPR / Cas9 na detekciu nesprávnych produktov CRISPR / Cas9 alebo na overenie výsledkov sekvenovania. SNP Pol DNA polymeráza vysoko špecificky rozlišuje, či je prítomná chyba v párovaní komplexu primer-templát-komplex alebo nie. Nesúlad (bodová mutácia) musí byť na 3' konci primeru. Mutantné alely sa teda dajú presne rozlíšiť od aliel divokého typu – bez sekvenovania, pretože v prípade nezhody sa polymeráza jednoducho neamplifikuje. Stačí umiestniť primer na predpokladanú bodovú mutáciu (bodová mutácia musí byť na 3' konci) a polymeráza deteguje nesúlad v tejto oblasti s takmer 100% presnosťou: Ak báza templátu komplementárna k 3' koncu primera ukazuje mutáciu a primer nie, neprebieha žiadna amplifikácia - 100% istota v krátkom čase!
• Variant SNP PolTaq DNA polymeráza má 5'-3' nukleázovú aktivitu a môže sa preto použiť pre špecifické hydrolyzačné sondy, ako sú sondy Taqman® alebo Molecular beacons.

Vlastnosti: 

• Vysoko selektívna DNA polymeráza - vysoká diskriminácia jednotlivých nukleotidov.
• Špeciálne vyvinutá pre alelovo špecifickú diskrimináciu, napr. v alelicky špecifickej PCR (ASA; AS-PCR), alelicky špecifickom predĺžení primeru (AS-PEX), SNP analýze, genotypizácii alebo v metylačne špecifickej PCR (MSP). Mnoho iných DNA polymeráz toleruje nesprávne spárované komplexy primer-templát, a preto nie sú vhodné. SNP Pol DNA polymeráza ich na druhej strane špecificky rozlišuje (vysoká diskriminácia) a dodáva iba produkty PCR s dokonale zhodnými pármi primerov.
• Je možné ju využiť pre humánnu medicínu a rastlinnú biotechnológiu (napr. technológia CRISPR/Cas9), na analýzu frekvencie rakovinových mutácií, kvantifikáciu rýchlosti mutácie na pozadí sekvencií divokého typu, na overenie frekvencií mutácií stanovených NGS, je vhodná aj na analýzu vzoriek tekutej biopsie.
• Na dosiahnutie najlepších výsledkov odporúčame navrhnúť priméry s krátkou dĺžkou amplikónu (asi 60-200 bp), v prípade dlhších amplikónov > 500 bp pridaním ďalšieho horčíka (+0,5 - 1,5 mM).
• Môže byť použitá spolu s nešpecifickými fluorescenčnými farbivami (napr. Genaxxon's Green DNA Dye > alebo SybrGreen®) v real-time PCR.

Oblasti použitia: 

• Monitorovanie, overovanie a detekcia bodových mutácií
• Identifikácia správnych alebo nesprávnych produktov CRISPR/Cas9
• Overenie/validácia výsledkov sekvenovania
• Kvantifikácia mutácií (napr. výsledky NGS)
• Detekcia SNP pomocou alelicky špecifickej amplifikácie (ASA) / Alelovo špecifickej PCR
• Metylačné špecifické PCR (MSP) po bisulfitovo upravenej DNA (CpG metylačné strany)
• HLA genotypizácia
• Mikrosekvenovanie
• PCR v reálnom čase s hydrolyzačnými sondami
• Multiplexné PCR v reálnom čase

Dostupné balenia: 

250U - M3009.0250

1000U - M3009.1000